La dihyrofolate réductase de type II R67 (DHFR R67) est une enzyme bactérienne encodée par un plasmide. Dépendant du cofacteur NADPH, elle catalyse la réaction de réduction du dihydrofolate en tétrahydrofolate, essentiel pour la prolifération cellulaire. La DHFR R67 est différente de l'enzyme DHFR chromosomale et résistante au triméthoprime, largement utilisé dans les traitements antibactériens chez l'Homme. Aucun inhibiteur sélectif contre la DHFR R67 n'est actuellement répertorié. Le but de cette étude a été d'identifier des molécules qui pourront inhiber la DHFR R67 sélectivement, sans affecter la DHFR humaine (DHFRh). L'étude de leurs activité enzymatique en présence des solvants organiques et liquides ioniques (LIs) a montré que certains LIs peuvent servir de milieu alternatif pour les essais enzymatiques. Le criblage rationnel a révélé des molécules primaires qui inhibent la DHFR R67 de façon faible, mais sélective. Le test des composés biologiquement actifs qui comprennent des petits fragments, a montré l'augmentation de l'affinité entre la DHFR R67 et les composés testés. Trois composés ont été déterminés comme des inhibiteurs sélectifs prometteurs pour la DHFR R67.