Bevor sich eine Zelle teilt muss das Erbmaterial vollständig dupliziert werden. Dieses Ereignis der DNA-Replikation unterliegt in eukaryotischen Zellen einer strengen Regulation. Die Aufklärung der dabei zugrunde liegenden Mechanismen wurde durch die Entwicklung von in vitro Replikationssystemen entscheidend vorangetrieben. Bis heute konnte jedoch kein vollständig lösliches humanes System etabliert werden, dass es erlaubt, die Ausbildung des prä-Replikationskomplexes (pre-RC) und die Initiation der DNA-Replikation zu untersuchen. In dieser Arbeit wird ein solches in vitro Replikationssystem vorgestellt, dass auf Extrakten aus HeLa- Zellen basiert. Mit Hilfe dieses Ansatzes werden regulatorische Mechanismen, die für die zellzyklusabhängige Initiation der DNA- Replikation essentiell sind charakterisiert. Zudem werden die einzelnen Schritte bei der sequentiellen Ausbildung des pre-RCs unabhängig von der Initiation der DNA-Replikation in Plasmid- Bindestudien biochemisch untersucht. Mit Hilfe rekombinanter Proteine wird die Rolle von Orc6 bei der Bindung des humanen "Origin recognition Complex" (ORC) an DNA und der pre-RC Ausbildung näher charakterisiert.